Нова зброя для діагностики туберкульозу та виявлення стійкості до ліків: цілеспрямоване секвенування нового покоління (tNGS) у поєднанні з машинним навчанням для діагностики гіперчутливості до туберкульозу
Літературний звіт: CCa: діагностична модель на основі tNGS і машинного навчання, яка підходить для людей з меншою кількістю бактеріального туберкульозу та туберкульозного менінгіту.
Назва дисертації: Секвенування наступного покоління та машинне навчання, орієнтоване на туберкульоз: ультрачутлива діагностична стратегія пауцифікальних легеневих канальців і канальцевого менінгіту.
Періодичне видання: 《Clinica Chimica Acta》
ЯКЩО: 6.5
Дата публікації: січень 2024 року
У поєднанні з Університетом Китайської академії наук і Пекінською грудною клінікою Столичного медичного університету компанія Macro & Micro-Test створила модель діагностики туберкульозу на основі технології цільового секвенування нового покоління (tNGS) і методу машинного навчання, що забезпечує надвисоку чутливість до виявлення туберкульозу з невеликою кількістю бактерій і туберкульозного менінгіту, забезпечила новий метод діагностики гіперчутливості для клінічної діагностики двох типів туберкульозу, а також допомогла встановити точний діагноз, виявити стійкість до ліків і лікувати туберкульоз.У той же час виявлено, що вкДНК плазми пацієнта може бути використана як відповідний тип зразка для клінічного забору в діагностиці ТБМ.
У цьому дослідженні 227 зразків плазми та спинномозкової рідини було використано для встановлення двох клінічних когорт, у яких зразки когорти лабораторної діагностики використовувалися для встановлення моделі машинного навчання діагностики туберкульозу, а зразки когорти клінічної діагностики використовувалися для перевірки встановленого діагностична модель.Усі зразки спочатку були націлені на мікобактерії туберкульозу спеціально розробленим цільовим пулом зондів для захоплення.Потім, на основі даних секвенування TB-tNGS, модель дерева рішень використовується для виконання 5-кратної перехресної перевірки на наборах для навчання та перевірки черги лабораторної діагностики, а також для отримання діагностичних порогів зразків плазми та спинномозкової рідини.Отриманий поріг вноситься до двох тестових наборів черги клінічної діагностики для виявлення, а діагностична ефективність учня оцінюється за кривою ROC.Нарешті була отримана модель діагнозу туберкульозу.
Рис. 1 – принципова схема дизайну дослідження
Результати: Відповідно до специфічних порогових значень зразка ДНК ЦСР (AUC = 0,974) і зразка вкДНК плазми (AUC = 0,908), визначених у цьому дослідженні, серед 227 зразків чутливість зразка СМР становила 97,01%, специфічність – 95,65%, а чутливість і специфічність зразка плазми склала 82,61% і 86,36%.При аналізі 44 парних зразків вкДНК плазми та ДНК спинномозкової рідини пацієнтів з ТБМ діагностична стратегія цього дослідження має високу узгодженість 90,91% (40/44) у вкДНК плазми та ДНК спинномозкової рідини, а чутливість становить 95,45% (42/44).У дітей з туберкульозом легенів діагностична стратегія цього дослідження більш чутлива до зразків плазми, ніж результати виявлення Xpert зразків шлункового соку тих самих пацієнтів (28,57% проти 15,38%).
Рис. 2 Результати аналізу моделі діагностики туберкульозу для вибірок населення
Рис. 3 Результати діагностики парних проб
Висновок: у цьому дослідженні було створено гіперчутливий метод діагностики туберкульозу, який може забезпечити діагностичний інструмент з найвищою чутливістю виявлення для клінічних пацієнтів з олігобацилярним туберкульозом (негативний посів).Виявлення гіперчутливого туберкульозу на основі вкДНК плазми може бути відповідним типом зразка для діагностики активного туберкульозу та туберкульозного менінгіту (зразки плазми легше зібрати, ніж цереброспінальну рідину для пацієнтів із підозрою на туберкульоз мозку).
Оригінальне посилання: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/s0009898123004990?через%3Dihub
Короткий огляд продуктів серії Macro & Micro-Test для виявлення туберкульозу
З огляду на складну ситуацію із зразками хворих на туберкульоз і різноманітні потреби, Macro & Micro-Test надає повний набір рішень NGS для розрідження зразків мокротиння, побудови бібліотеки Qualcomm і секвенування, а також аналізу даних.Продукти охоплюють швидку діагностику хворих на туберкульоз, виявлення стійкості туберкульозу до ліків, типування мікобактерій туберкульозу та НТМ, діагностику гіперчутливості бактеріонегативних туберкульозу та туберкульозних людей тощо.
Серійні набори для виявлення туберкульозу та мікобактерій:
Пункт № | Назва продукту | зміст тестування продукту | тип зразка | застосовна модель |
HWTS-3012 | Зразок відокремлювача | Використовується в обробці розрідження зразків мокротиння, отримав рекордний номер першого класу, Sutong Machinery Equipment 20230047. | мокрота | |
HWTS-NGS-P00021 | Набір Qualcomm для визначення кількості гіперчутливого туберкульозу (метод захоплення зондом) | Неінвазивне (рідка біопсія) виявлення гіперчутливості для бактеріонегативного туберкульозу легенів і вузликів у мозку;Зразки людей, підозрюваних на інфікування туберкульозними або нетуберкульозними мікобактеріями, були проаналізовані методом глибокого секвенування метагеноміки, а також інформація про виявлення того, чи були інфіковані туберкульозні чи нетуберкульозні мікобактерії, а також основна інформація про лікарську стійкість мікобактерій туберкульозу першої лінії. були надані. | Периферична кров, альвеолярний лаваж, гідроторакс і асцит, пункція вогнища, спинномозкова рідина. | Друге покоління |
HWTS-NGS-T001 | Набір для типування мікобактерій та виявлення резистентності до ліків (метод секвенування мультиплексної ампліфікації) | Тест на типування мікобактерій, включаючи MTBC та 187 NTM;Виявлення стійкості Mycobacterium tuberculosis до ліків охоплює 13 ліків і 16 основних сайтів мутації генів стійкості до ліків. | Мокрота, альвеолярний лаваж, гідроторакс і асцит, пункція вогнища, спинномозкова рідина. | Подвійна платформа другого/третього покоління |
Основні характеристики: HWTS-NGS-T001 Набір для типування мікобактерій і виявлення стійкості до ліків (метод мультиплексної ампліфікації)
Представлення продукту
Продукт базується на основних препаратах першого та другого ряду, описаних у рекомендаціях ВООЗ щодо лікування туберкульозу, макролідах та аміноглікозидах, які зазвичай використовуються в рекомендаціях щодо лікування НТМ, а сайти резистентності до ліків охоплюють всю одну групу сайтів, пов’язаних із резистентністю до ліків у Каталог комплексних мутацій Mycobacterium tuberculosis ВООЗ, а також інші зареєстровані гени стійкості до ліків і сайти мутацій згідно з дослідженнями та статистичними даними літератури з високими балами в країні та за кордоном.
Ідентифікація типів базується на штамах NTM, узагальнених у рекомендаціях NTM, опублікованих Китайським журналом туберкульозу та респіраторних захворювань, і на консенсусі експертів.Розроблені праймери для типізації можуть ампліфікувати, секвенувати та анотувати понад 190 видів NTM.
Завдяки технології цільової мультиплексної ПЛР-ампліфікації генотипні гени та гени стійкості до ліків Mycobacterium були ампліфіковані за допомогою мультиплексної ПЛР, і була отримана комбінація ампліконів цільових генів, які потрібно виявити.Ампліфіковані продукти можна сконструювати у високопродуктивні бібліотеки секвенування другого або третього покоління, і всі платформи секвенування другого та третього поколінь можна піддати глибокому секвенуванню для отримання інформації про послідовність цільових генів.Шляхом порівняння з відомими мутаціями, що містяться у вбудованій довідковій базі даних (включно з каталогом комплексних мутацій Mycobacterium tuberculosis ВООЗ та його зв’язком із стійкістю до ліків), було визначено мутації, пов’язані зі стійкістю до ліків або чутливістю до протитуберкульозних препаратів.У поєднанні з рішенням Macro & Micro-Test для обробки зразків мокротиння, що самостійно відкривається, було вирішено проблему низької ефективності ампліфікації нуклеїнових кислот у клінічних зразках мокротиння (в десять разів вище, ніж у традиційних методів), так що можна виявити секвенування резистентності до ліків. безпосередньо наноситься на клінічні зразки мокротиння.
Діапазон виявлення продукту
34гени, пов'язані з лікарською стійкістю18протитуберкульозні препарати і6Виявлено наркотики НТМ, охопл297сайти лікарської стійкості;Десять видів Mycobacterium tuberculosis і більше190видів NTM виявлено.
Таблиця 1: Інформація про 18+6 препаратів +190+NTM
Перевага продукту
Сильна клінічна адаптивність: зразки мокротиння можуть бути безпосередньо виявлені за допомогою агента саморозрідження без посіву.
Експериментальна операція проста: перший етап операції посилення простий, а будівництво бібліотеки завершується за 3 години, що покращує ефективність роботи.
Комплексне типування та виявлення стійкості до ліків: охоплення сайтів типування та резистентності до ліків MTB і NTM, які є ключовими точками клінічного занепокоєння, точне типування та виявлення стійкості до ліків, підтримка програмного забезпечення незалежного аналізу та створення звітів про аналіз одним клацанням миші.
Сумісність: сумісність продуктів, адаптація до основних платформ ILM і MGI/ONT.
Специфікація продукту
Код продукту | Назва продукту | Платформа виявлення | технічні характеристики |
HWTS-NGS-T001 | Набір для типування мікобактерій та виявлення стійкості до ліків (метод мультиплексної ампліфікації) | ONT、Illumina、MGI、Salus pro | 16/96rxn |
Час публікації: 23 січня 2024 р